產品名稱：Cellartis iPSC Single-Cell Cloning DEF-CS™ Culture Media Kit         

產品貨號：Y30021

產品說明：

我們的CRISPR / Cas9系統是介導哺乳動物細胞中基因組編輯的一種簡單的，RNA可編程的方法；它可用于在hiPS細胞中產生基因敲除（通過插入/刪除）或敲除（通過HDR）。交付Cas9-sgRNA核糖核蛋白（RNP）復合物后，必須分離單個細胞并將其擴增為克隆細胞系，以分離和篩選目標基因型。傳統上，從作為集落生長和傳代的經過編輯的hiPS細胞建立克隆種群效率低下且耗時。通常，它會導致細胞死亡或過早分化。為克服這一挑戰，我們開發了完整的系統，該系統通過有效傳遞Cas9-sgRNA RNP復合物和hiPS細胞的單細胞克隆，將無足跡的基因編輯結合在一起。使用我們基于單層的培養系統可成功完成單細胞克隆

產品介紹：

人誘導多能干細胞（Human induced pluripotent stem cells，hiPSCs)是一個功能強大的研究工具和疾病模型，因為其具備增殖、自我更新、分化為多種細胞類型的能力。此外，人iPS細胞還可以再現細胞來源個體的疾病表型和基因型。將人iPS細胞結合基于CRISPR/Cas9的基因編輯技術，可以在同基因的細胞系中研究特定基因改變引起的功能影響，因為基因編輯過的人iPS細胞能提供可再生的、無遺傳變異的患病細胞和健康細胞資源。

CRISPR/Cas9系統已經成為一個強大的基因編輯工具，因為其高的靶向特異性，編輯效率和易用性。該技術的強大主要源于它的簡單，因為全部只需要一個Cas9核酸酶結合一個單鏈向導RNA（single guide RNA，sgRNA) 就可以決定靶向特異性（Jinek et al. 2012)。這種RNA編程的（RNA-programmable）方法利用了非同源末端連接(non-homologous end joining，NHEJ) DNA修復途徑的易錯特性，進而產生基因敲除(通過插入/刪除)。這種方法也可以通過同源重組（homology-directed repair，HDR)途徑被用于基因敲入。

 CRISPR/Cas9系統的組件可以通過多種方法成功導入至靶細胞，包括基于載體的表達系統，RNA轉染, 導入Cas9/sgRNA核糖核蛋白（ribonucleoprotein，RNP)復合物(Sander and Joung 2014)等。與基于載體的方法相比，直接導入Cas9/sgRNA RNPs提供了一種快速轉入基因編輯實驗的方法，同時脫靶效應的可能性更小（Kim et al. 2014)。

 一旦Cas9/sgRNA RNP復合物被導入，為了分離和篩選感興趣的基因型，單細胞必須被分離并擴增為克隆細胞系。傳統上,從基因編輯的hiPS細胞建立一個克隆群是低效的、具有挑戰性的和耗時的，因為hiPS 細胞是以集落生長和傳代的。通常，這會導致細胞死亡和提前分化。然而，Cellartis基因編輯和單細胞克隆系統包含一個成分確定的培養系統(由基礎培養基，包被劑，和添加劑組成)，用于有效形成單細胞克隆和擴增基因編輯后的hiPSC克隆。DEF-CS culture system (Asplund et al. 2016)是一個基于單層培養的系統，規避了集落狀培養帶來的挑戰，允許單細胞傳代和促進接種的單細胞存活和后續擴增。

 Cellartis iPSC Single-Cell Cloning DEF-CS Culture Media Kit (Code No. Y30021) 是一個完整的，在無飼養層和成分確定條件下，用于hiPSCs有效擴增和擴大生產的系統。試劑盒包含了從接種單細胞至96孔板到擴增至48孔板過程中所有必要的試劑。單細胞克隆擴增后，hiPSCs可以使用Cellartis DEF-CS 500 Culture System (Code No. Y30010)繼續培養。

 Cellartis iPSC rCas9 Electroporation and Single-Cell Cloning System (Code No. 632643) 是一個完整的系統，允許通過電穿孔的方法對hiPSCs進行有效的基因編輯以及隨后的單細胞克隆形成和擴增至48孔板。該系統中提供了重組Cas9蛋白質，以及產生大量sgRNAs所有必要的試劑，用于電穿孔hiPSCs。系統中也包括Cellartis iPSC Single-Cell Cloning DEF-CS Culture Media Kit (前面所述) 組份，用于進行基因編輯后的單細胞克隆形成和擴增。單細胞克隆擴增后，hiPSCs可以使用Cellartis DEF-CS 500 Culture System (Code No. Y30010)繼續培養。

 Cellartis iPSC CRISPR/Cas9 Gesicle and Single-Cell Cloning System (Code No. 632642)是一個完整的系統，允許通過gesicle導入Cas9/sgRNA復合物進行有效的基因編輯隨后的單細胞克隆形成和擴增至48孔板。Gesicles是一種無毒的、高效的、替代電穿孔的方法，不依賴昂貴的設備或耗材。系統中提供所有的必要試劑用于產生細胞衍生的納米囊泡（稱做gesicles），來轉導Cas9和sgRNA至hiPSCs。系統中也包括Cellartis iPSC Single-Cell Cloning DEF-CS Culture Media Kit（前面所述）組份，用于進行基因編輯后的單細胞克隆形成和擴增。單細胞克隆擴增后，hiPSCs可以使用Cellartis DEF-CS 500 Culture System (Code No. Y30010)繼續培養。

 ■ 產品特點

·在hiPSC中進行高效的基因編輯—使用電穿孔或囊泡來遞送Cas9蛋白和sgRNA，而沒有基因組整合并且降低脫靶效應

·優異的單細胞存活率—編輯的hiPSC植入96孔板中的單個細胞

·編輯后和單細胞克隆期間保持多能性-hiPSC維持多能性標記Oct-4，TRA-1-60和SSEA-4的高水平（> 90％）

·穩定的核型從頭到尾—在編輯，單細胞克隆和擴增過程中保持正常且穩定的核型

·靈活地按自己的方式進行基因編輯實驗-選擇完整的試劑盒，該試劑盒可以使用基于電穿孔的（Code No. 632643）或基于囊泡的（Code No. 632642）CRISPR / Cas9技術提供編輯和單細胞克隆解決方案，或者在您自己的編輯實驗后，利用培養基試劑盒（代碼Y30021）執行有效的單細胞克隆

·在整個基因編輯/單細胞克隆實驗中繼續使用DEF-CS技術-使用Cellartis DEF-CS 500培養系統（代碼編號Y30010）在基因編輯實驗之前和之中，然后在單細胞克隆實驗之后放大期間

產品名稱：CellArits代理 iPSC單細胞克隆培養基試劑盒        產品貨號：Y30021

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品牌       貨號       產品描述                                                               包裝

CellArtis  Y30010     DEF-CS 500 Culture System,DEF-CS 500培養系統，人iPS和人ES增殖用培養基  1套

CellArtis  Y30021     Cellartis iPSC Single-Cell Cloning DEF-CS™ Culture Media Kit           1套

CellArtis  Y40030     GS2-M小鼠 iPS/ES干細胞無血清培養基                                     1套

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1993年，以中國的寶生物工程（大連）有限公司為中心，建立了研究用試劑的生產制造工廠，其中關于分子生物學及細胞生物學分支的研究用試劑的制造已經取得了ISO9001認證，產品具有很高的品質和成本競爭力。
    關于研發，Takara Bio構建了日美歐中一體的研究開發體系。利用各地特性建設開發小組，努力提升新產品、新服務的開發力度及開發速度，從而形成更好的產品更快地投入市場的體制。
關于銷售，通過美國、歐洲、中國、韓國及印度的子公司和Takara Bio形成了*的銷售網，努力提高「TaKaRa®」「Clontech®」「Cellartis®」產品的品牌度并擴大產品銷售。
Takara Bio在引以為傲的基因工程學領域基礎上，也著手于未來有望拓展市場的再生醫療、細胞醫療研究領域的產品開發。在基因工程學方面，著重于擴大PCR技術的應用領域（Applied Field），及已處于市場日益增長的新一代測序相關新產品的開發等。在再生醫療、細胞醫療研究領域，正不斷地進行處于研發活躍期的iPS細胞（人工多能干細胞）及基因組編輯相關的新產品和新服務項目的開發。

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華雅再生醫學旗艦公司-紅榮微再（上海）生物工程技術有限公司：干細胞、細胞凍存、細胞治療、試劑耗材 相關板塊的產品，以“傳遞科學價值，服務科學研究”為宗旨，經過近五年的努力推廣，重慶市華雅干細胞技術有限公司在全中國代理的BD科研產品、OriGen干細胞凍存袋等產品已經成功銷往：上海市、北京市、重慶市、天津市、廣東省的廣州市、深圳市、珠海市、江西省的南昌市、四川省的成都市、綿陽、浙江省的杭州市、寧波、溫州、江蘇省的南京市、蘇州、無錫、泰州、湖南省的長沙、陜西省的西安市、楊凌、甘肅省的蘭州、寧夏的銀川、新疆的烏魯木齊、廣西的南寧市、山東省的濟南、青島、東北三省 遼寧省的沈陽市、大連市、吉林省的長春市、黑龍江省的哈爾濱市等中國絕大部分省市和自治區。

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