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PAXgene Blood RNA Kit

用于從PAXgene Blood RNA Tubes中穩(wěn)定的血液中分離和純化細胞內(nèi)RNA

• 用于體外診斷，使用PAXgene Blood RNA Tubes
• 用于收集，穩(wěn)定和凈化的集成系統(tǒng)
• RNA穩(wěn)定在18-25°C下長達3天
• 在-20°C或-70°C下穩(wěn)定至少60個月
• 分析前的標準化樣品處理

      PAXgene Blood RNA系統(tǒng)由用于血液收集，穩(wěn)定和轉(zhuǎn)運的PAXgene Blood RNA Tubes（可從BD獲得，目錄號762165）和用于基于硅膠膜的RNA分離和純化的PAXgene Blood RNA Kit組成。 可以使用微量離心機手動進行純化，或在QIAcube上自動進行純化。該系統(tǒng)已獲得FDA營銷許可，并提供體外診斷用途的精確性能規(guī)格。

一、性能

      PAXgene Blood RNA Tubes用于收集全血并在18-25°C下穩(wěn)定細胞內(nèi)RNA長達3天（或在2-8°C下多5天）。目前可獲得的數(shù)據(jù)顯示細胞RNA在-20°C或-70°C下穩(wěn)定至少60個月。

      使用PAXgene Blood RNA System純化的總RNA是高純度的，A ₂₆₀ / A ₂₈₀值在1.8和2.2之間且≤1.0％（w / w）基因組DNA。當使用多達30％的洗脫液時，至少95％的樣品在RT-PCR中沒有顯示出抑制作用。

      用PAXgene Blood RNA System和自動化方案純化的RNA是高純度的，如缺乏RT-PCR抑制（見上文）和A ₂₆₀ / A ₂₈₀值在1.8和2.2之間所示。通過β-肌動蛋白基因序列的定量實時PCR測量，基因組DNA以≤1％（w / w）存在于≥95％的所有樣品中。

     使用PAXgene Blood RNA系統(tǒng)進行RNA純化的自動化方案提供了高度可重復和可重復的RT-PCR結(jié)果，使其對臨床診斷測試具有高度可靠性。

二、原理

      PAXgene Blood RNA Kit用于從PAXgene Blood RNA Tube中收集的2.5 ml人全血中純化總RNA。該過程很簡單，可以使用手動或自動程序進行。

      PAXgene Blood RNA Tubes含有基于RNA穩(wěn)定技術的試劑組合物（美國6,602,718和6,617,170）。該試劑組合物保護RNA分子免受RNase的降解，并使基因表達的離體變化小化。PAXgene Blood RNA Tubes用于收集全血并在18-25°C下穩(wěn)定細胞內(nèi)RNA長達3天或在2-8°C下多5天。目前可獲得的數(shù)據(jù)顯示細胞RNA在-20℃或-70℃下穩(wěn)定至少60個月。

三、程序

      PAXgene Blood RNA程序很簡單，可以使用手動或自動程序進行

1、手動PAXgene血液RNA程序

      純化開始于離心步驟以在PAXgene Blood RNA Tube中沉淀核酸。將沉淀洗滌并重懸浮，并在優(yōu)化的緩沖液中與蛋白酶K一起孵育以產(chǎn)生蛋白質(zhì)消化。通過PAXgene Shredder旋轉(zhuǎn)柱進行另外的離心以使細胞裂解物均質(zhì)化并除去殘留的細胞碎片，并將流出級分的上清液轉(zhuǎn)移到新的微量離心管中。加入乙醇以調(diào)節(jié)結(jié)合條件，并將裂解物應用于PAXgene RNA旋轉(zhuǎn)柱。在短暫離心期間，當污染物通過時，RNA選擇性地結(jié)合到PAXgene二氧化硅膜上。在幾個有效的洗滌步驟中除去剩余的污染物。在*和第二洗滌步驟之間，用DNase I處理膜以除去痕量的結(jié)合DNA。洗滌步驟后，將RNA在洗脫緩沖液中洗脫并加熱變性。 

2、自動化PAXgene血液RNA程序

      在QIAcube上自動化的樣品制備遵循與手動程序相同的步驟，使您能夠繼續(xù)使用PAXgene Blood RNA Kit純化高質(zhì)量RNA。

      自動RNA純化方案由2部分（或方案），“PAXgene Blood RNA Part A”和“PAXgene Blood RNA Part B”組成，兩部分之間有簡短的人工干預。

      將離心，洗滌和重懸的核酸沉淀從PAXgene Blood RNA Tube轉(zhuǎn)移到處理管中，將其置于QIAcube工作臺上的熱振蕩器單元中。操作員從菜單中選擇并啟動“PAXgene Blood RNA Part A”協(xié)議。QIAcube執(zhí)行協(xié)議的步驟，直至在洗脫緩沖液中洗脫RNA。操作人員將含有純化RNA的微量離心管轉(zhuǎn)移到QIAcube的熱水瓶單元中。操作員從菜單中選擇并啟動“PAXgene Blood RNA Part B”協(xié)議，并通過QIAcube進行熱變性。

      平均樣品制備時間（基于來自12個樣品制備的數(shù)據(jù)）為125分鐘，僅有約20分鐘的實際操作時間。

四、應用

      當該試劑盒與PAXgene Blood RNA Tubes一起使用時，該系統(tǒng)提供來自全血的細胞內(nèi)RNA用于分子診斷測試中使用的RT-PCR。

PAXgene Blood RNA Kit產(chǎn)品詳細信息

50個PAXgene旋轉(zhuǎn)柱，50個PAXgene粉碎機旋轉(zhuǎn)柱，加工管，無RNase DNase I，無RNase試劑和緩沖液。與PAXgene Blood RNA Tubes配合使用

  品牌                           貨號                                       名稱                                     

Qiagen                       762164                      PAXgene Blood RNA Kit       

 BD                             762165                      PAXgene Blood RNA Tube 

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