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Cellex natural killer cell kit protocol
使用流程：
1， PBMC的分離：
a) 準(zhǔn)備一支含20ml Ficoll的離心管，將30ml抗凝血（為肝素抗凝的外周血）直接加入管中，800G，升速1,降速1,離心15min；
b) 離心后，將血漿吸出移入另一個50ml離心管中（約15-20ml），將白膜層吸出移入兩個15ml離心管中，補充PBS，離心800G，9min；
血漿56℃滅活25min，然后離心3000rpm，3min，待用；
c) 離心后，棄上清，用 PBS重懸細(xì)胞，將細(xì)胞吹勻后離心，400G，9min；洗滌2次；
d) 用10ml NKGM（I/Kit）重懸細(xì)胞沉淀，計數(shù)待用。
注：分離PBMC時應(yīng)注意觀察血小板是否分離干凈，如去不凈可用培養(yǎng)基（NKGM）多洗一次。
2， 刺激活化PBMC步驟
注：整個培養(yǎng)流程中，細(xì)胞應(yīng)處于較為靜止的狀態(tài)，除加液和轉(zhuǎn)移等必須步驟，應(yīng)避免劇烈吹打和震蕩細(xì)胞。
a) day0，用20ml PBS輕柔清洗初始NK細(xì)胞培養(yǎng)袋（K/Kit）兩次；按照下列表格定容，然后用50ml注射器注入初始培養(yǎng)袋中；使用注射器,將培養(yǎng)袋中空氣抽凈，防止培養(yǎng)袋中有較大的氣泡存留；培養(yǎng)袋做好標(biāo)記，放入37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

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Serial
產(chǎn)品名稱
公司/品牌
貨號
描述
規(guī)格
1
natural killer cell culture kit
Cellex
17510500
NK細(xì)胞初期培養(yǎng)袋 (K/Kit)
10ml
Cellex
16087585
NK細(xì)胞培養(yǎng)基 (I/Kit)
1000ml
Cellex
16087583
NK細(xì)胞培養(yǎng)基-培養(yǎng)袋 (T/Kit)
2 x 1000ml

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